紫外可見分光光度計是一種很重要的分析儀器,在使用一臺新的紫外可見分光光度計儀器前,一般需要先對儀器的線性度進行測試。但大多數(shù)使用者只是在某一試樣的某一濃度附近,用濃度的倍數(shù)變化來測出這一段的線性度。這只能反映儀器在小范圍內(nèi)的使用情況,并不能說明儀器的線性度是否符合出廠指標,也不能反映儀器的線性范圍。因此,在儀器使用前對其線性度的測試有著重要的意義。
紫外可見分光光度計工作原理:比爾在研究了各種無機鹽的水溶液對紅光的吸收情況后指出,光的吸收和光所遇到的吸光物質(zhì)的數(shù)量有關(guān),如果吸光物質(zhì)溶于不吸光的溶劑中,則吸光度和吸光物質(zhì)的濃度成正比。即當單色光通過液層厚度一定的有色溶液時,溶液的吸光度與溶液的濃度成正比,這就是比爾定律。
紫外可見分光光度計主要由光源系統(tǒng)、單色器系統(tǒng)、樣品室、檢測系統(tǒng)組成。紫外可見分光光度計的技術(shù)指標主要有11個,即波長準確度、波長重復性、光度準確度、光度重復性、雜散光、光譜帶寬、基線平直度、穩(wěn)定性、光度噪聲、線性度、線性動態(tài)范圍。除了線性動態(tài)范圍,其他的技術(shù)指標一般都在儀器指標中寫出明確的測量方法及要求。紫外可見分光光度計的線性度在定量分析工作中有著極其重要的意義,如果儀器的線性度很差,就不可能得到好的定量分析結(jié)果。
分光光度計線性度測試的方法很多,常用的方法大致有:
1、溶液稀釋法:將重鉻酸鉀稀釋到不同濃度,測量不同波長處的吸光度(一般需測85個吸光度值),然后根據(jù)此數(shù)據(jù)作曲線,判斷線性度。
2、中性濾波片法:一般以3塊中性濾波片疊加,比較測定值與計算值之差來判斷線性度。
3、百分法:使被測試樣濃度成倍增加,測其吸光度并作曲線,判斷實驗值偏離比爾定律直線部分的程度。
4、改變池厚法:用不同厚度的樣品池來測量重鉻酸鉀的吸光度,以此觀察光度計的線性度。
5、旋轉(zhuǎn)扇形板法:將不同透射率的扇形板置于樣品光束中旋轉(zhuǎn),測出各點透射率并與真值進行
比較。
6、光疊加法:利用雙孔規(guī)來分段測量,然后用曲線判斷線性度。